在药物研发与质量控制中，液相色谱（HPLC）是杂质检测的核心工具。然而，实验过程中频繁出现的“双峰”现象，常令分析人员陷入困惑。这种现象不仅可能掩盖真实杂质信息，还会对药物安全性评价造成潜在风险。本文结合恒丰万达医药科技有限公司实践经验，解析了液相双峰的五大成因，并通过检测典型案例揭示其背后的化学本质。

      液相检测；图谱；双峰；图谱解析。

      在药物储存或实验条件下，化合物可能因环境因素（如pH、温度）发生降解或次级反应，导致结构变化并生成新物质。例如：

      环氧化合物开环：酸性或碱性条件下，环氧化合物易发生开环反应（图1），表现为双峰。

图1：开环反应

      脱羧酸反应：一些容易掉的基团掉落，变成了一种极性相当的其他化合物。以达格列净杂质23为例，图2中检测出现双峰的原因，正是因为发生了脱羧酸，变成了API。

图2 达格列净杂质23液相检测图谱

图3 达格列净与达格列净杂质23

      酰胺片段断裂：以乌帕替尼杂质5为例，研究发现该杂质液相中酰胺片段易发生掉落，降解成为API，在液相检测中就很容易出现双峰图谱（图4）。

图4 乌帕替尼杂质5检测图谱

图5 乌帕替尼与乌帕替尼杂质5

      含酮基或烯醇基的化合物（如艾瑞昔布杂质）在溶液中可发生互变异构，两种形式极性差异导致液相图谱中也会出现双峰。

图6 艾瑞昔布杂质中的互变异构

      因为α-H具备酸性，故醛酮具有互变异构。通常发生互变异构的因素有以下几种：

      溶剂极性：非极性溶剂中烯醇式比例升高，极性溶剂中酮式更稳定；

      pH值：酸性条件促进烯醇式形成，碱性条件则反之；

      温度：温度升高，分子振动加剧，烯醇式形成的分子内氢键减弱，互变异构移向酮式；

      供试品溶液放置时间：酮式-烯醇式互变需要时间，供试品溶液放置时间影响峰型；

      样品稀释剂：稀释剂导致异构变化的发生。

图7 醛酮互变异构

      含醛基的化合物（如醋酸氟轻松EP杂质D、甲泼尼杂质8）易与醇类溶剂或样品基质发生缩醛加成，生成新产物。此类反应具有以下特点：

      可逆性：加成产物可能在色谱过程中部分解离，导致主峰后出现“肩峰”或独立峰。

      浓度依赖性：高浓度样品中分子碰撞概率增加，双峰现象更为显著。

      这里分别举例醋酸氟轻松EP杂质D、甲泼尼杂质8的液相检测。

      醋酸氟轻松EP杂质D：液相出了双峰，经调研是发生了缩醛加成。

图8 我司的检测结果（左）以及测定的MS（右）

图8续 客户液相单峰（左）以及客户测定质谱（右）

图9 酸氟轻松EP杂质D的缩醛加成

      甲泼尼杂质8：液相主峰后面有较大杂质，结合核磁氢谱分析发现是发生了缩醛加成。

图10 甲泼尼杂质8的缩醛加成

图11 甲泼尼杂质8检测图谱

      亚硝胺结构含有顺反异构，在液相中容易出双峰，且分离度通常不高。

图12 亚硝胺化合物

      我司在测定我帕替尼杂质44发现液相出双峰，经调查，其原因是结构中含有手性S。

图13 乌帕替尼杂质44含有手性S导致液相双峰

      液相色谱中的双峰不仅是技术挑战，更是揭示化合物本征性质的“化学探针”。通过系统性解析其成因，我们得以更精准地把控质量。

      当然，检测过程中遇到的情况种类繁多，绝非仅有上述几种。其他类型杂质检测问题，后续接着分享，感谢我司检测中心人员提供的资料，同时感谢我司客户反馈给我们的数据，恒丰万达（湖北）医药科技有限公司一直深耕在杂质标准品/对照品领域，助力我国医药科技创新发展。

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